Prinsip lan Metode Analisis Kuantitatif dening Kromatografi Cairan

Mekanisme pamisahan kromatografi cair adhedhasar prabédan ing afinitas komponen ing campuran kanggo rong fase.

Miturut fase stasioner sing beda-beda, kromatografi cair dipérang dadi kromatografi cair-padat, kromatografi cair-cair lan kromatografi fase terikat.Sing paling akeh digunakake yaiku kromatografi cair-padat kanthi silika gel minangka pengisi lan kromatografi fase terikat kanthi mikrosilika minangka matriks.

Miturut wujud fase stasioner, kromatografi cair bisa dipérang dadi kromatografi kolom, kromatografi kertas lan kromatografi lapis tipis.Miturut kapasitas adsorpsi, bisa dipérang dadi kromatografi adsorpsi, kromatografi partisi, kromatografi pertukaran ion lan kromatografi permeasi gel.

Ing taun-taun pungkasan, sistem aliran cairan tekanan dhuwur wis ditambahake menyang sistem kromatografi kolom cair kanggo nggawe aliran fase seluler kanthi cepet ing tekanan dhuwur kanggo nambah efek pamisahan, saengga kromatografi cair kanthi efisiensi dhuwur (uga dikenal minangka tekanan dhuwur). wis muncul.

PART
01 Prinsip Analisis Kuantitatif Kromatografi Cairan

Kanggo ngitung adhedhasar kualitatif, zat murni dibutuhake minangka standar;

Kuantifikasi kromatografi cair minangka cara sing relatif kuantitatif: yaiku, jumlah analit ing campuran dikira saka jumlah sampel standar murni sing dikenal.

PART
02 Dhasar kanggo Kuantifikasi dening Kromatografi Cairan

Jumlah komponen sing diukur (W) sebanding karo nilai respon (A) (dhuwur puncak utawa area puncak), W=f×A.

Faktor koreksi kuantitatif (f): Iku konstanta proporsionalitas rumus pitungan kuantitatif, lan makna fisike yaiku jumlah komponen sing diukur sing diwakili dening nilai respon unit (area puncak).

Faktor koreksi kuantitatif bisa dipikolehi saka jumlah sampel standar sing dikenal lan nilai respon.

Ukur nilai respon komponen sing ora dingerteni, lan jumlah komponen bisa dipikolehi kanthi faktor koreksi kuantitatif.

PART
03 Istilah umum ing analisis kuantitatif

Sampel (sampel): solusi sing ngemot analit kanggo analisis kromatografi.Dipérang dadi sampel standar lan ora dingerteni.

Standar: Produk murni kanthi konsentrasi sing dikenal.Sampel sing ora dingerteni (ora ngerti): Campuran sing konsentrasi bakal dites.

Bobot sampel: Bobot asli saka sampel sing bakal diuji.

Dilution: Faktor pengenceran sampel sing ora dingerteni.

Komponen : puncak kromatografi sing bakal dianalisis sacara kuantitatif, yaiku analit sing ora dingerteni isine.

Jumlah komponen (jumlah): isi (utawa konsentrasi) saka zat sing bakal diuji.

Integeritas: Proses komputasi kanggo ngukur area puncak puncak kromatografi kanthi komputer.

Kurva kalibrasi: Kurva linear isi komponen versus nilai respon, diadegake saka jumlah zat standar sing dikenal, digunakake kanggo nemtokake isi analit sing ora dingerteni.

PART
04 Analisis Kuantitatif Kromatografi Cairan

1. Pilih cara kromatografi sing cocok kanggo analisis kuantitatif:

l Konfirmasi puncak komponen sing dideteksi lan entuk resolusi (R) luwih saka 1,5

l Nemtokake konsistensi (kemurnian) puncak kromatografi komponen sing diuji

l Nemtokake watesan deteksi lan watesan kuantifikasi cara;sensitivitas lan sawetara linear

2. Nggawe kurva kalibrasi kanthi sampel standar kanthi konsentrasi sing beda

3. Priksa akurasi lan presisi metode kuantitatif

4. Gunakake piranti lunak manajemen kromatografi sing cocog kanggo ngleksanakake koleksi sampel, pangolahan data lan asil laporan

PART
05 Identifikasi puncak kuantitatif (kualitatif)

Identifikasi kanthi kualitatif saben puncak kromatografi sing bakal diukur

Kaping pisanan, gunakake sampel standar kanggo nemtokake wektu retensi (Rt) saka puncak kromatografi sing bakal diukur.Kanthi mbandhingake wektu retensi, temokake komponen sing cocog karo saben puncak kromatografi ing sampel sing ora dingerteni.Cara kualitatif kromatografi yaiku mbandhingake wektu retensi karo sampel standar.Kriteria ora cukupkonfirmasi luwih (kualitatif)

1. Metode tambahan standar

2. Gunakake cara liya ing wektu sing padha: metode kromatografi liyane (ngganti mekanisme, kayata: nggunakake kolom kromatografi sing beda), detektor liyane (PDA: perbandingan spektrum, telusuran perpustakaan spektrum; MS: analisis spektrum massa, telusuran perpustakaan spektrum)

3. Instrumen lan metode liyane

PART
06 Konfirmasi Konsistensi Puncak Kuantitatif

Konfirmasi konsistensi puncak kromatografi (kemurnian)

Priksa manawa mung ana siji komponen sing diukur ing saben puncak kromatografi

Priksa interferensi saka zat co-eluting (kotoran)

Cara Konfirmasi Konsistensi Puncak Kromatografi (Kemurnian)

Mbandhingake Spectrograms karo Photodiode Matrix (PDA) Detektor

Identifikasi Kemurnian Puncak

2996 Teori Sudut Kemurnian

Cara kuantitatif sing umum digunakake ing PART 07

Metode kurva standar, dipérang dadi metode standar eksternal lan metode standar internal:

1. Metode standar eksternal: paling akeh digunakake ing kromatografi cair

Serangkaian conto standar konsentrasi sing dikenal disiapake nggunakake conto murni saka senyawa sing bakal diuji minangka conto standar.disuntikake menyang kolom nganti nilai respon (area puncak).
Ing rentang tartamtu, ana hubungan linear sing apik antarane konsentrasi sampel standar lan nilai respon, yaiku W = f × A, lan kurva standar digawe.

Ing kahanan eksperimen sing padha, nyuntikake sampel sing ora dingerteni kanggo entuk nilai respon saka komponen sing bakal diukur.Miturut koefisien f sing dikawruhi, konsentrasi komponen sing bakal diukur bisa dipikolehi.

Keuntungan saka metode standar eksternal:operasi prasaja lan pitungan, iku cara kuantitatif umum digunakake;ora perlu kanggo saben komponèn dideteksi lan eluted;sampel standar dibutuhake;kahanan pangukuran sampel standar lan sampel sing ora dingerteni kudu konsisten;volume injeksi kudu pas.

Kekurangan metode standar eksternal:Kondisi eksperimen kudu dhuwur, kayata sensitivitas detektor, tingkat aliran, lan komposisi fase seluler ora bisa diganti;volume saben injeksi kudu repeatability apik.

2. Metode standar internal: akurat, nanging troublesome, paling digunakake ing cara standar

Jumlah standar internal sing dikawruhi ditambahake menyang standar kanggo nggawe standar campuran, lan seri standar kerja kanthi konsentrasi sing dikenal disiapake.Rasio molar standar kanggo standar internal ing standar campuran tetep ora owah.Nyuntikake menyang kolom kromatografi lan njupuk (wilayah puncak sampel standar / area puncak sampel standar internal) minangka nilai respon.Miturut hubungan linear antarane nilai respon lan konsentrasi standar kerja, yaiku W= f×A, kurva standar digawe.

Jumlah standar internal sing dikenal ditambahake menyang sampel sing ora dingerteni lan disuntikake menyang kolom kanggo entuk nilai respon komponen sing bakal diukur.Miturut koefisien f sing dikawruhi, konsentrasi komponen sing bakal diukur bisa dipikolehi.

Karakteristik metode standar internal:Sajrone operasi kasebut, sampel lan standar internal dicampur lan disuntikake menyang kolom kromatografi, supaya anggere rasio jumlah komponen sing diukur karo standar internal ing solusi campuran tetep, owah-owahan volume sampel. ora bakal mengaruhi asil kuantitatif..Cara standar internal ngimbangi pengaruh volume sampel, lan malah fase seluler lan detektor, saengga luwih akurat tinimbang metode standar eksternal.

PART
08 Faktor sing Ngaruhi Asil Analisis Kuantitatif

Akurasi sing kurang bisa disebabake:

Integrasi area puncak sing ora bener, dekomposisi sampel utawa impurities sing ditepungake nalika nyiapake sampel, botol sampel ora disegel, sampel utawa volatilisasi pelarut, persiapan sampel sing salah, masalah injeksi sampel, persiapan standar internal sing salah

Alasan sing bisa nyebabake presisi sing kurang:

Masalah integrasi puncak sing salah, masalah injeksi utawa injektor, dekomposisi sampel utawa impurities sing ditepungake sajrone nyiapake sampel, masalah kromatografi, respon detektor sing rusak